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ELISA實驗操作對試劑盒本身的影響
更新時間:2019-02-26   點擊次數(shù):1638次

 ELISA試劑盒在科研領(lǐng)域運用尤為廣泛,它以其特異性強和靈敏度高的特色被我們所親睞,今日與我們說說ELISA試劑盒測定的過程。
    ELISA試劑盒測定過程:
    固相包被→加待測樣品→溫育→洗刷+加酶標物→溫育→洗刷→加底物→溫育一加中止液→比色→斷定效果。

    ELISA試劑盒操作較冗繁,在操作中應(yīng)留心以下4個方面:
    1.在成批手藝檢測中,還應(yīng)留心操作時差的影響。加樣及混勻時刻的差異,使抗原抗體反應(yīng)和酶促反應(yīng)時刻不一致,對競爭法及定量檢測影響很大,不留心可能會導(dǎo)致過錯效果或定量不準。
    2.洗刷是ELISA試劑盒操作過程中抉擇實驗成敗的一個關(guān)鍵過程。目的是除去未結(jié)合的免疫反應(yīng)物,中止抗原抗體反應(yīng),除去標本中與反應(yīng)無關(guān)的成分、游離的酶標物以及反應(yīng)過程中吸附于固相載體上的非特異性物質(zhì)??捎孟窗鍣C洗板或手藝洗板,前者洗刷質(zhì)量較好,各反應(yīng)孔洗刷作用均一,批內(nèi)、批間差異小,手藝洗板應(yīng)留心控制各孔洗刷作用,差異不宜太大。
    3.跟著病情的發(fā)展或由其他要素影響,某些抗體在機體內(nèi)的含量發(fā)作大幅動搖,因此有必要對標本進行預(yù)處理。直接法測定中,標本恰當稀釋還可下降非特異性反應(yīng)。
    4.加樣一般運用加液器,在ELISA試劑盒中一般有4次加樣:加標本、加酶結(jié)合物、加底物和加中止液。加標本時有必要每份標本運用一支移液器吸嘴,避免穿插污染。加酶結(jié)合物、底物和中止液時則不需更換吸嘴。
  
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